2019年12月以來(lái)，新型冠狀肺炎疫情仍在肆虐。國(guó)家對(duì)新型冠狀肺炎以及相關(guān)的病媒生物威脅公共安全加大投入力度，各地疾控中心也開(kāi)始病媒生物研究篩選預(yù)防工作。在我國(guó)法定報(bào)告的傳染病中有許多屬于病媒生物性傳染病，如鼠疫、流行性出血熱、鉤端螺旋體病、瘧疾、登革熱、地方性斑疹傷寒、絲蟲(chóng)病等；而一些消化道傳染病則通過(guò)病媒生物的機(jī)械性傳播在人群中擴(kuò)散，如痢疾、傷寒等。

病媒生物性傳染病是人類(lèi)共同面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)之一。通過(guò)對(duì)病媒生物的有效控制，可以減少它們對(duì)人群的騷擾和經(jīng)濟(jì)損失，更可以預(yù)防和控制病媒生物性傳染病的發(fā)生和傳播。加強(qiáng)病媒生物疾病預(yù)防控制已成為一個(gè)迫切的任務(wù)。安徽省疾病預(yù)防控制中心毒理科做病媒生物實(shí)驗(yàn)時(shí)，就使用上海凈信冷凍研磨儀。

實(shí)驗(yàn)背景：鼠類(lèi)不僅傳播鼠疫、流行性出血熱、鉤端螺旋體病、斑疹傷寒等多種疾病，嚴(yán)重危害人類(lèi)健康;而 且通過(guò)嚙咬、盜食、污染等方式給工業(yè)、農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)等造成直接或間接的經(jīng)濟(jì)損失。

一、材料和方法：

樣品來(lái)源于居民區(qū)及收治醫(yī)院周 圍 環(huán) 境 采 集 目 標(biāo) 病 媒 生 物。160份鼠肺樣品來(lái)自本地，15份蜚蠊體表擦拭子來(lái)自安徽等地。所有樣品均凍存于-80攝氏度待檢。

二、儀器及試劑：

1、上海凈信冷凍研磨儀

2、熒光定量PCR分析儀

3、高效病毒濃縮試劑盒

4、巢式RT-PCR所采用的引物,一步法RT-PCR試劑盒

5、RNA提取試劑盒

三、 實(shí)驗(yàn)方法

1、樣品RNA的提取 別取待檢鼠肺組織于全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀充分再加入異硫酸氰胍溶液，充分溶解后于-20℃保存，備蜚蠊體表擦拭子中加入無(wú)菌生理鹽水少許于4℃中過(guò)夜，擠壓后取出棉拭子，將剩余液體離心5min，其上清液則用高效病毒濃縮試劑盒進(jìn)行濃縮，濃縮所得的晶體中再加入異硫酸氰胍溶液，充分溶解后于-20℃保存?zhèn)溆?，按照試劑盒的說(shuō)明 從樣品的異硫酸氰胍溶液中提取提取所得的RNA保存?zhèn)溆谩?/p>

樣品研磨前后

實(shí)驗(yàn)步驟：

1、準(zhǔn)備全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀。

2、金屬適配器，以及鋼珠適配器。

3、將老鼠組織剪碎，放入研磨管，加入鋼珠。

4、將適配器裝入凈信研磨儀中，開(kāi)啟低溫功能保持溫度。

5、設(shè)定參數(shù)，啟動(dòng)儀器至研磨程序結(jié)束，可得到如圖所示樣品。

儀器介紹：

上海凈信JXFSTPRP-CLN冷凍研磨儀是一種快速、高效、制冷的研磨系統(tǒng)。它能在非常短的時(shí)間內(nèi)將土壤、植物和動(dòng)物的組織/器官、細(xì)菌、酵母、真菌、孢子、古生物標(biāo)本等樣品完成研磨、粉碎、混合機(jī)細(xì)胞破壁。廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)藥、生化、環(huán)境、地質(zhì)、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、質(zhì)檢、材料等領(lǐng)域。